2017（第三届）毒性测试替代方法与转化毒理学（国际）学术研讨会

9 / 2017-05-19 12:16:20

自噬与EMT在亚砷酸钠所致肝细胞恶性转化中的作用及分子机制

砷中毒；自噬；肝细胞；上皮间质转化；恶性转化

目的：用NaAsO2处理人肝L-02细胞并构建NaAsO2慢性处理所致人L-02细胞恶性转化模型，运用多种分子生物学方法探讨NaAsO2处理对miR-21的影响及miR-21对自噬的调控作用，并进一步研究了自噬和EMT在NaAsO2所致肝细胞恶性转化中的作用及其部分分子机制。方法：用0.0、1.0、2.0、4.0或8.0 μM NaAsO2分别处理L-02细胞24 h，或分别用0.0或2.0 μM NaAsO2分别急性处理肝L-02细胞0、3、6、12或24 h后或慢性处理0，10，20，30代后；分别用100 nM anti-miR-21和anti-miR-nc 转染L-02细胞，或分别用pCDNA-PTEN和pCDNA质粒转染L-02细胞24 h，然后用暴露于0.0或2.0 μM NaAsO2同样处理24 h；分别用100 nM anti-miR-21或anti-miR-nc和25 nM PTEN siRNA或Con siRNA共转染L-02细胞24 h，然后再用2.0 μM NaAsO2处理24 h。结果：1、NaAsO2可以引起L-02细胞miR-21水平升高、ERK激活和自噬水平增加；2、在NaAsO2处理的L-02细胞中敲除miR-21可以抑制ERK激活，降低自噬水平；3、NaAsO2处理导致恶转T-L-02细胞自噬流阻滞，p62蛋白聚积，Snail蛋白高表达，介导细胞发生EMT，诱导细胞发生恶性转化；4、在NaAsO2恶转的T-L-02细胞中，敲除p62水平可降低Snail蛋白的表达，逆转EMT蛋白表达，降低NaAsO2所致的恶性转化T-L-02细胞恶性程度和转移侵袭能力。结论：1、miR-21通过靶蛋白PTEN调控ERK在NaAsO2所致肝细胞自噬中发挥重要作用；2、NaAsO2自噬流阻滞引起肝细胞p62高表达，累积了Snail进而引起EMT，,从而诱导肝细胞发生恶性转化。